一、原理 本試劑盒采用直接競爭ELISA方法，在微孔條上預包被抗體，樣本中的殘留物氯霉素和氯霉素酶標記物抗原競爭微孔條上預包被的抗體，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物氯霉素的含量成負相關(guān)，與標準曲線(xiàn)比較可得出相應殘留物氯霉素的含量。 ? 二、試劑盒技術(shù)指標 試劑盒靈敏度：???????? 0.1ppb 樣本定量檢測下限?????? 蜂蜜? 0.1 ppb 牛奶? 0.05 ppb??? 雞肉/雞肝、豬肉/豬肝、蝦、魚(yú)? 0.05 ppb?????????? 交叉反應率 氯霉素?? ? 100 ％ 甲砜霉素?? < 0.1％ 氟甲砜霉素 < 0. 樣本回收率 雞肉/雞肝、豬肉/豬肝、蝦、魚(yú)? 80％±20％ 蜂蜜???????????????????????? 75％±15％ 牛奶???????????????????????? 80％±20％ ? 三、?試劑盒組成 1．微量測試孔：??????? 96T/8孔 2．標準品液：（1mL/瓶）0 ppb? 0.05 ppb? 0.15 ppb?? 0.45 ppb?? 1.35 ppb? 4.05 ppb 3．酶標記物????????? 7 mL 4．底物緩沖液破????? 7 mL 5．底物液??????????? 7 mL 6．終止液??????????? 7 mL 7．20倍濃縮洗滌液?? 50 mL? 加蒸餾水稀釋到1000 mL 8．20倍復溶液?????? 12 mL? 加蒸餾水稀釋到240 mL ? ? 四、樣本前處理步驟 1.??????**（雞肉，魚(yú)肉，蝦肉，豬肉）前處理方法 將樣品勻質(zhì)，稱(chēng)取樣品3g，加入3 mL蒸餾水，震蕩均勻，再加入6 mL乙酸乙酯，震蕩10min。5000r/min離心10min，吸取上層2 mL，40℃旋轉蒸發(fā)至干，加入1 mL正己烷溶解干燥物，再加入1 mL復溶液復溶。去除上層正己烷，取下層清液50μL待測。 2.牛奶，牛初乳 溶液1：0.36M亞鐵**鉀溶液。稱(chēng)取152.06g亞鐵**鉀，定容至1L。 溶液2：1.04M**鋅溶液。稱(chēng)取299.01g**鋅，定容至1L。 稱(chēng)取樣品9.6mL，分別加入溶液1和溶液2各200μL，震蕩均勻，5000r/min離心10min。吸取上清3mL至另一離心管中，加入6mL乙酸乙酯，震蕩10min，5000r/min離心10min。吸取上層2mL，40℃選擇蒸發(fā)至干。加入1mL正己烷溶解干燥物，再加入1mL復溶液復溶。去除上層正己烷，取下層清液50μL待測。 3.肝臟（豬肝） 稱(chēng)取樣品3g，再加入6mL乙酸乙酯，震蕩10min。于80℃左右熱水中水浴8min，5000r/min離心10min，吸取上層2mL，40℃選擇蒸發(fā)至干。加入1 mL正己烷溶解干燥物，再加入1 mL復溶液復溶。去除上層正己烷，取下層清液50μL待測。 4.雞蛋 稱(chēng)取樣品3g，加入6 mL乙酸乙酯，震蕩10min。于80℃左右熱水中水浴8min，5000r/min離心10min。吸取上層2 mL，40℃選擇蒸發(fā)至干。加入1 mL正己烷溶解干燥物，再加入1 mL復溶液復溶。去除上層正己烷，取下層清液50μL待測。 ? 注意： 復溶時(shí)一定要先加入正己烷溶解干燥物，再加入PBS復溶。震蕩過(guò)程不宜太劇烈，防止乳化。 ? 五、操作步驟 1． 將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出并將所需試劑從試劑盒取出，置室溫（20-25℃）平衡30min以上, 注意每種液體試劑使用前均須搖勻。 2． 按需要取出微孔條及板架，將不用的微孔板重新密封，保存于2-8℃，不要冷凍。 3． 加標準品/樣本50μL /孔，然后加入酶標高物50μL /孔，再振蕩混勻，用封板膜蓋板，37℃條件下反應25 min（室溫反應30min）。 4． 洗板4-5次，每次浸泡30秒，拍干。 5． 顯色：每孔加入底物緩沖液50μL，再加底物液50μL，輕輕振蕩混勻，37℃或室溫環(huán)境避光顯色10min。 6． 測定：每孔加入終止液50μL，輕輕振蕩勻，設定酶標儀于450nm處（在20min內讀完數據），測定吸光度值。 ? 六、 結果判定 以標準品百分吸光率為縱坐標，以氯霉素標準品濃度（ng/mL）的半對數為橫坐標，繪制標準曲線(xiàn)圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線(xiàn)中，從標準曲線(xiàn)上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中氯霉素實(shí)際濃度。 ? 七、 注意事項 1.終止液為2M**，避免接觸皮膚。 2.不要使用已過(guò)有效日期的孔雀石綠檢測試劑盒；不同批次、不同試劑盒之間的試劑等內容不可混用，以免降低靈敏度。 3. 0標準液的A450nm<0.6時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)，請勿使用。 4.顯色劑變藍，表明已變質(zhì)，請勿使用。 ? 八、儲藏條件和保質(zhì)期 儲藏條件：試劑盒于2-8℃保存，不要冷凍。 保 質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為1年，生產(chǎn)日期見(jiàn)包裝盒。